第一节　体内样品种类

　　血清、血浆的区别：加入抗凝剂后，全血离心制的血浆。不加抗凝剂，自然沉降后离心制的血清。

　　考点3：尿液的分类与采集

　　尿液的采集：测定尿液中药物浓度——自然排尿、时间尿测定尿液中药物总量——自然排尿、各时间段全部尿液

第二节　体内样品处理

　　考点1：体内样品处理的常用方法(1)去除蛋白质法(2)缀合物水解法(3)萃取分离法(4)化学衍生化法

　　考点2：去除蛋白质的方法：(1)蛋白质沉淀法：加与水混溶的有机溶剂脱水、加入强酸生成不溶性盐、加无机盐盐析(2)蛋白分解法——蛋白水解酶(枯草菌溶素)

　　考点3：缀合物水解法(1)酸水解(HCl)：简便、快速，但专一性差(2)酶水解：β-葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶、两者混合酶，专属性高

　　考点4：分离纯化与浓集常用方法(1)液-液萃取——选用与水不相混溶的有机溶剂进行提取(2)离子对萃取法(3)固相萃取法——利用柱色谱进行分离

　　考点5：化学衍生化法衍生化目的(1)增加组分的稳定性(2)改善被测组分的色谱行为(3)增加被测物的检测灵敏度和选择性(4)提高对光学异构体分离的能力衍生化方法(5)GC——硅烷化、酰化、烷基化(6)HPLC——荧胺、丹酰氯、邻苯二醛(柱前衍生化、柱后衍生化)(7)手性衍生化法

第三节　体内样品测定

　　考点1：常用测定方法

　　考点2：定量分析方法验证(1)特异性内源性物质的干扰、代谢产物的干扰、同用药物的干扰要求：6个不同来源的空白体内样品色谱图、空白体内样品外加标准物质色谱图(注明浓度)及用药后的体内样品色谱图。(体外分析的专属性)

　　(2)标准曲线与线性范围要求：用至少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质，线性范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。随行空白体内样品，但标准曲线不包括零点。(体外分析要求至少5个浓度)

　　(3)定量下限标准曲线上的最低浓度点。S/N应大于5.实际测定时，满足3～5个半衰期浓度，或Cmax1/10～1/20.至少5个标准样品测试结果证明。(体外分析要求S/N=10)

　　(4)精密度与准确度样品选择：选择3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下限3倍以内，高浓度接近于标准曲线的上限附近;中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。

　　精密度：批内精密度、批间精密度(不同天连续制备3个分析批)。用RSD表示，要求小于15%，在最低定量限附近小于20%.准确度：准确度用相对回收率表示。一般应在85%～115%范围内，在最低定量限附近应在80%～120%范围内。(体外分析要求95-105%)

　　(5)样品稳定性表示一种分析物在确定条件下，一定时间内在给定介质中的化学稳定性。

　　要求：根据具体情况，对含药生物样品(或储备液、样品处理液)在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察。

　　(6)提取回收率分析过程的提取效率，能反映出样品预处理过程中组分丢失的情况，是评价萃取方案优劣的指标之一。以样品提取和处理过程前后分析物含量百分比表示。

　　要求：考察高、中、低3个浓度的提取回收率，其值一般应一致，但重要的是重现性好。

　　(7)质控样品在生物介质中加入已知量待测药物所配制的样品，用于质量控制。

　　(8)质量控制应在生物样品分析方法验证完成之后开始测试未知样品，每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。

　　每批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并平行测定高、中、低3个浓度的质控样品。

　　质控样品测定结果的偏差一般应小于15%.